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rtpCr实验的材料

RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术.首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段.RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平,细胞中RN

原理:RT-PCR 为反转录RCR(reverse transcription PCR)和实时PCR(real timePCR)共同的缩写.逆转录PCR,或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形.在RT-PCR中,一条RNA

不晓得你说的是RT-PCR(reverse transcription PCR)呢,还是实时PCR(real-time PCR).如果是反转录的话,步骤如下:1.电泳定量RNA或直接测定RNA浓度.2.反转录体系:(20 μl)RNA+DEPC 水:11μl,RNA量1-5μgOligo dT:1μl 5X RTase Buffer:4μl (10X RTase Buffer 2μl + 2μl DEPC 水)Ribololck Rnase Inhibitor:1μldNTP:2μlRTase :1μlTotal:20 μl42℃放置60min,70℃放置5min终止反应.3.稀释母液模板,进行PCR反应.

要准备好内参引物,目的基因引物,和反转录好的模板,其他的就按普通PCR扩增就可以了.

2008-08-31 01:34:23【PCR】RT-PCR实验方法总结小结 RT-PCR实验有三步:抽提RNA,RT,PCR. 要求:1.做RT前必需测RNA浓度,逆转录体系对RNA量还是有一些要求,常用500ng或1ug.2. RT按要求做,一般不会出太大问题. 3. PCR,按常规.但如需扩长片段,则对前两步要. [阅读全文]

买个反转录的试剂盒,你只需要准备无RNA的耗材就可以了,也就是枪头、离心管这些.

RTPCR的关键步骤是在RNA的反转录,要求RNA模版为完整的且不含DNA、蛋白质等杂质

RT-PCR实验,主要分为3步:1. total RNA的提取2. mRNA的反转录3. 荧光定量PCR消除DNA污染:1. 按照说明书加入足量的Trizol,细胞过多会引起DNA污染.2. 现在已经有去除基因组污染的反转录试剂盒,已经在很多实验室常用.你可以尝试一下.

实验中的一些好习惯加入试剂之前,把它混匀一下,以免放置时间长了浓度不均移液枪用完之后要归到最大计量的位置,防止久而久之弹簧失去弹性一定要记着关水浴箱,

额,你好,PCR的原料因为对象的不同而不同,因为一个多月前我还在做淡水腹足类的DNA分析,所以就以此为例来讲吧(如果忽略DNA的提取过程,所有物种所需原料都相同):单纯是PCR扩增的话,可以选择

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